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大小鼠肿瘤切片模具的操作、实验试剂以及方法
发布时间:2018-12-24   点击次数:154次
   大小鼠肿瘤切片模具的操作、实验试剂以及方法
  
  大小鼠肿瘤切片模具包括大鼠脑模具和小鼠脑模具。脑模具经过精密机械加工和高度抛光,可确保切片过程的可重复性。使用材料为不锈钢,结实耐用,可被加热、冷却、高压灭菌(只限不锈钢型)、擦洗,经得起苛刻的使用条件。冠状脑模具具有矢状中线,可方便的分离左右脑半球。切片精度至1mm,小鼠脑模具也适用于新生大鼠。
  
  如何进行大小鼠肿瘤切片模具模型的建立及鉴定实验肿瘤学的需要导致肿瘤动物模型的产生,借以研究人类肿瘤的病因、发生、发展以及治疗和预防。大小鼠肿瘤切片模具可来自于动物的自发肿瘤、诱发肿瘤和移植性肿瘤。
  
  一前两者由于对动物品系要求严格、实验周期较长或缺少实验一致性而较少使用。大小鼠肿瘤切片模具具有特性明确、生长一致性好、实验周期短、瘤株分布广泛、可反复复制等优点,在肿瘤研究中占有重要地位。可移植性肿瘤,是把动物或人的肿瘤移植到同系、同种或异种动物,经传代后,组织类型和生长特性已趋稳定,并能在受体动物中继续传代,又称为可移植性肿瘤细胞。
  
  二可移植性肿瘤移植于同系或同种动物,称为同种移植,是常用的肿瘤动物模型复制方法之一。同种移植的优点是,可供选择使用的细胞系或细胞株多,许多细胞系在世界范围分布广泛,并且这些细胞的生物学特性已经比较明确,一般都有明确的背景资料,使一群动物同时接种同样量的瘤细胞,生长速度一致、个体差异较小,成活率高,易于对照观察,这些都是便于科研成果相互比较和交流的有利因素
  
  三在接种过程中,应把握注射深度,否则易造成内脏损伤。接种后三天即开始观察有无肿瘤形成。本实验具有周期短、制作方便、成功率比较高、较好重复性和稳定性的明显优势,是一种较为理想的肿瘤实验动物模型,值得推广。
  
  二.大小鼠肿瘤切片模具的实验试剂以及方法
  
  大小鼠肿瘤切片模具模型的建立:
  
  抗肿瘤药物及制剂的药效学评价,可通过建立小鼠荷瘤数据模型,探索肿瘤生长的本质及其发生发展的规律,探究其抗肿瘤效果。
  
  方法:
  
  小鼠右腋下注射H22肿瘤细胞,注射部位发生癌变,小鼠肿瘤生长明显,切片结果证明实验成功,模型构建完成,使小鼠荷瘤,观察肿瘤生长,记录体重数据并建立动物模型。
  
  取20只昆明鼠随机分成A组(10只),B组(5只),C组对照组(5只),编号饲养。
  
  1.1.2试剂:
  
  无菌水,生理盐水,台酚蓝,2%冰醋酸,甲醛,乙醇,二甲苯,石蜡等。
  
  1.1.3仪器:
  
  离心机,显微镜,计数板,电子称,超净工作台,温箱,切片机等。
  
  三.实验步骤
  
  取H22肿瘤细胞,3000转离心分钟,再用无菌生理盐水洗涤肿瘤细胞3次,并做适当稀释,取40微升细胞悬液加入10微升0.4%台酚蓝染色并镜检计数,制成浓度为3*106个/ml的肿瘤细胞悬液,每只小鼠右腋皮下接种肿瘤细胞悬液0.2毫升。
  
  细胞计数液2%冰醋酸溶液。取50微升细胞悬液加入450微升的细胞计数液中计数。
  
  接种完成后,逐日观察接种部位有无感染,肿瘤生长后有无自然消退,用游标卡尺,每周测量肿瘤长径a和短径b,并计算平均直径,即r=(a+b)/2,每天称量小鼠体重和肿瘤并记录,绘制曲线。
  
  1.4制备组织切片:
  
  a处死小鼠,将肿瘤组织切成1*1*0.4cm的小块。
  
  b将切块的组织置于螺口瓶中,加入40%甲醛固定,过夜。
  
  c固定完成后,倒出固定液,立即换上新鲜的70%乙醇,洗脱两次,室温放置20分钟,继而以75%,80%,85%,90%,95%,100%乙醇脱水各两次,每次20分钟。
  
  d从新鲜二甲苯除去乙醇,放置2次,每次10分钟。
  
  e将样品置于60℃温箱中融化石蜡4次,每次1.5小时。
  
  f将准备好的包埋工具,用一热玻璃吸管加入融化的石蜡,再用热镊子快速将样品移至充满石蜡的模具中,置于室温,使起完全凝结。
  
  g从包埋模具中取出石蜡块,放于室温干燥处,切片
  
  
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